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茶皂素在血吸蟲病防治上應用的研究Ⅰ.茶皂素對血吸蟲中間宿主釘螺的殺滅效果 用茶皂素對日本血吸蟲中間宿主釘螺進行殺滅實驗，初步結(jié)果表明：不同類型的茶皂素浸殺成螺、幼螺和螺卵均有較好的殺滅效果。其中茶皂素Ⅰ2.5mg/L，茶皂素Ⅱ、Ⅲ5.0mg/L，浸殺釘螺效果均為100%噴殺成螺所需濃度較高，效果也稍差。茶皂素對淡水魚類有一定的毒性，但比氯硝胺毒性低得多，茶皂素Ⅰ在1.6mg/L 以下，水溫在28℃，48h，鰱魚全部存活。并且，藥物資源豐富，價格低廉，對環(huán)無污染，是一種具有開發(fā)前景的植物殺螺劑。文中還對不同類型茶皂素的毒性差異原因、施用濃度和方法進行了討論。
Study on the Application Saponin in the Prevention and Cure of Shistosomiasis I.Using Tea Saponin as the Mollucicide to Oncomelania ,the Intermediate Host of Schistosmiasis Zhang Shushang,Zhou LiHong,Zhu Jinhua (Hunan Institute of Parasitic Disease,Yueyang 414000) Xia Chuunhua,Zhu Juanfen,LiuRongxiang (Tea Reaearch Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Hangzhou 310008) Abstract According to the experiments on Oncomelania,the intermediate host of Schistosom mansoni,tea saponin, used as the molluscicide,showedeffective efficacy on the adult and juvenile snails and the snail eggs.Mortalities of 100% was obtained by immersing the molluse and their eggs with 2.5-5.0mg/L tea saponin solution,and of 82%-90% by spraying the adult snails with tea saponin under the dosages of 5-20%g/m2.Tea saponin showed much lower toxicity to freshwater fish than Niclosamide,and its easy availability,low price botanieal origin and nonpollution made its broad developing prospects.Toxicity and operation techniques of tea saponin as the molluscicide was detailed. Key words:Tea saponin,Oncomelania,Toxicity 前 言 日本血吸蟲病是一種寄生蟲病，已在我國南方12個省市自治區(qū)流行，感染血吸蟲者達1200萬人，有螺面積148萬㎡，并且仍在蔓延擴展，嚴重危害和威脅著我國人民的健康和生命，消滅釘螺是防治血吸蟲病的一項重要措施，其中藥物滅螺是當前的主要滅螺措施。國內(nèi)常用的滅螺藥物五氯酚鈉，對人畜毒性大，有“三致”作用，且污染環(huán)境，世界衛(wèi)生組織已禁止生產(chǎn)和使用。氯硝柳胺殺螺效果雖好，但價格昂貴，其50%可濕性粉達6萬元/噸以上，目前經(jīng)濟上難以承受。尋求一種資源豐富，能就地取材，并且對環(huán)境無污染的天然植物殺螺劑，已是當務之急。 目前世界上研究的有效植物殺螺劑中，有效成分均為皂甙類物質(zhì)，如埃塞俄比亞研究所的植物殺螺劑恩多特漿果，我國正在研究的薯蕷科植物。許多植物如山茶科、豆科、毛莨科等均系所含的皂甙成分起殺螺作用。茶皂素是從茶籽餅中提取出來的一種天然植物皂素，F(xiàn)在已經(jīng)證明，茶皂素在海水里對魚類等變溫動物具有很強的毒性，并且資源豐富，價格低廉。為此，于1993—1994年在實驗室進行了茶皂素殺釘螺實驗和淡水里的魚毒性實驗，現(xiàn)報告如下：
材料和方法 （一）材料 1、藥物 供試藥物系云南、浙江、湖南產(chǎn)的茶皂素Ⅰ（含量55.8%），茶皂素Ⅱ（63.3%），茶皂素Ⅲ（含量80%）茶皂素Ⅳ（含量79.5%），以上藥物均為黃色粉末，易溶于水，均系中國農(nóng)科院茶葉研究所綜合利用研究室統(tǒng)一提取分析。用藥時胺有效成分計算用量。 2、釘螺 成螺和幼螺從岳陽市君山島湖洲采集。 3、釘卵 為實驗室繁殖之4日齡卵，并在體視顯微鏡下選擇泥皮完整，無裂縫之螺卵供實驗用。 4、魚苗 從漁場 購回，置于實驗室大水缸內(nèi)飼養(yǎng)。鰱魚體長3.3—3.8㎝。 （二）方法 1、浸泡殺螺 將4種不同型號的茶皂素用去氯自來水配成不同濃度藥液各 1000ml，每組茶皂素分5個濃度組，以清水為空白對照組，各投放裝有50只活釘螺的尼龍袋3袋，在20、25、30℃恒溫下，浸殺1、2、3d后，每天取出1袋釘螺，用清水沖洗干凈、良干，于第四田用敲擊法測定釘螺死活，并用Bliss法計算藥物對釘螺的LC50及LC90和顯著性檢驗。 2. 噴殺成螺 取20×40×5㎝搪瓷方盤，內(nèi)墊一塊海綿，在上面做成2㎝厚的泥面，中間留有一直徑5㎝的圓孔，將活釘螺放在泥面上，每盤100只，讓其活動。4種不同型號茶皂素，每種分3各劑量組，每組2盤釘螺。將藥物分別用水溶解，然后用噴霧器將各組藥液分別均勻噴灑于方盤內(nèi)，[噴水量以泥面不積水為原則。定期在方盤內(nèi)中央孔放少量清水，以保持泥面潮濕，不開裂。噴藥后不同時間取出1盤釘螺測定死亡率。 3.浸殺螺卵 4種不同茶皂素按不同濃度分組。用100ml燒杯，每組3杯，每杯投螺卵100個，加入不同濃度藥液50ml，分別浸殺3、5、7d后，每天取出1杯，用清水漂洗三次，加清水孵化，觀察幼螺孵出率。同時設(shè)清水做對照。 4.浸殺幼螺 從現(xiàn)場采集3-4旋幼螺，用吸管分別到50ml燒杯內(nèi)，每杯放幼螺50只，用濾紙吸干水分尼龍紗封住杯口，防止幼螺爬出，再方到200ml燒杯內(nèi)，加不同濃度藥液200ml，其分組與殺成螺分組相同，每組為2杯，浸殺48h，72h后各取1杯幼螺在解剖鏡下，用針刺法測幼螺死亡數(shù)。設(shè)清水做空白對照。 5.魚毒實驗 從現(xiàn)場購回魚苗，室內(nèi)馴養(yǎng)7d，每2天換水1次。選擇健康魚苗，按長江水產(chǎn)科學研究所制訂的《魚類毒性實驗暫行規(guī)定》方案進行實驗。 結(jié) 果 1.對成螺的浸殺效果 在25℃恒溫下，4種不同型號茶皂素浸殺釘螺48h，結(jié)果表明：茶皂素Ⅰ1.25mg/L，茶皂素Ⅱ5.0mg/L、茶皂素Ⅲ5.0mg/L浸殺成螺死亡率均為100%；茶皂素Ⅳ8.0mg/L浸殺，成螺死亡率96%。不同溫度下不同類型的茶皂素對釘螺的半數(shù)致死濃度LC50見表1。經(jīng)顯著檢驗，茶皂素Ⅰ優(yōu)于茶皂素Ⅱ，茶皂素Ⅱ優(yōu)于茶皂素Ⅳ，其差異均呈顯著性（P<0.01），茶皂素Ⅱ于與Ⅲ的殺螺效果無顯著差異（P<0.05）。 表1 不同型號茶皂素在不同溫度下對釘螺的LC50結(jié)果
2.對成螺的噴殺效果 4種不同型號茶皂素在室溫25.3℃（22.5-28℃）時，茶皂素Ⅰ5.0g/㎡,茶皂素Ⅱ20g/㎡，茶皂素Ⅲ20g/㎡及茶皂素Ⅳ20g/㎡第七天釘螺校正死亡率分別為84.4，88.9，88.9%和80%，殺螺效果相近，而用量以茶皂素Ⅰ最小，茶皂素Ⅱ和Ⅲ相近，茶皂素Ⅳ次之（表2）。 3.對螺卵的浸殺效果 4種茶皂素在平均室溫26.3℃時，浸殺螺卵7d，茶皂素Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ濃度分別為5.0、10.0、10.0、20.0mg/L殺螺卵效果均打100%，以茶皂素Ⅰ殺螺卵效果最好，用量最小；茶皂素Ⅱ和Ⅲ相似，茶皂素Ⅳ次之（見表3）。 表2 4種茶皂素室內(nèi)噴殺釘螺效果
表3 4種茶皂素浸殺釘螺卵效果
表4 4種茶皂素浸殺幼螺的效率
4、對幼螺的浸殺效果 4種不同類型茶皂素在平均室溫29.4℃（25-33℃）時，茶皂素Ⅰ 1.25mg/L，茶皂素Ⅱ5.0mg/L，茶皂素Ⅲ5.0mg/L，茶皂素Ⅳ5.0mg/L，殺幼螺效果分別為100%、96.2%、100%和69.0%，其中以茶皂素Ⅰ最好，茶皂素Ⅱ和Ⅲ相似，茶皂素Ⅳ次之（見表4）。 5、魚毒實驗結(jié)果 在平均室溫28℃時，茶皂素Ⅰ 1.25mg/L使鰱魚全部死亡，而在1.6mg/L以下全部存活；茶皂素Ⅱ和Ⅲ5.0mg/L時，48h內(nèi)鰱魚全部死亡，而4.0mg/L 以下，則全部存活；茶皂素Ⅳ10.0mg/L，使鰱魚全部致死，而在5.0mg/L以下全部存活。 討 論 4種不同類型的茶皂素對日本血吸蟲中間宿主釘螺的殺滅效果實驗、結(jié)果表明，茶皂素對釘螺的殺滅效果是肯定的。無論是成螺、幼螺和螺卵，在茶皂素濃度2.5-10mg/L范圍內(nèi)，其浸殺效果均可達100%，這與以往有關(guān)實驗基本一致。 但是，本實驗發(fā)現(xiàn)4種類型的茶皂素對釘螺的殺滅效果不同，甚至差異很大，無論是成螺、幼螺或螺卵呈同一趨勢，同時還發(fā)現(xiàn)4種茶皂素對淡水魚類的毒性亦不盡相同，值得提出來加以討論。 從實驗結(jié)果看，茶皂素Ⅰ殺滅釘螺效果最好，浸殺濃度2.5mg/L其效果能達100%，茶皂素Ⅱ、Ⅲ次之，浸殺濃度5.0mg/L其效果才能達到100%，茶皂素Ⅳ浸殺濃度8.0mg/L，其效果只能達到96%，根據(jù)已有的研究結(jié)果分析，這可能與茶皂素原產(chǎn)地的茶樹品種有關(guān)，這4種茶皂素是屬不同產(chǎn)地的茶籽種提取出來的。產(chǎn)地不同，品種也不一樣，如茶皂素Ⅰ屬云南大葉種喬木型茶樹，其種子中的茶皂素的化學結(jié)構(gòu)在品種之間存在差異，茶籽皂素本身由7種結(jié)構(gòu)及比例不同的甙元所組成的混合物。 研究表明，皂甙類物質(zhì)溶血作用或毒性的強弱與化學結(jié)構(gòu)有密切關(guān)系，尤其是與糖體部分有關(guān)。但皂甙溶血作用明顯，；、呋喃緇醇雙皂甙和中性三萜雙皂甙的作用較弱，甚至無作用。皂甙元與糖體部分呈酸性的單皂甙和雙皂甙的活性則呈中等。三萜類皂甙元的A環(huán)上極性基因較強，D和E環(huán)上取代基極性較弱，溶血作用強。關(guān)于這一點，在Mott對埃塞俄比亞的恩多特漿果三萜皂甙的結(jié)構(gòu)分析中亦得到證實，其殺螺效果與提取時糖鏈在配基的位置有關(guān)。而據(jù)已有研究表明，茶皂素的糖體部分在配基A環(huán)C-3位上以雙皂甙存在。這是個值得今后探討的問題。 茶皂素對人畜口服無毒；對對蝦無毒殺作用；在水中48h能自動分解，對淡水魚在5mg/L以下無毒殺作用。本實驗以鏈魚為材料在浸殺條件下，茶皂素Ⅰ在1.6mg/L以下，茶皂素Ⅱ和Ⅲ4.8mg/L，48h后全部存活，茶皂素Ⅳ在5.0mg/L亦無毒殺作用。這樣更為在魚類得到保護的情況下達到殺滅釘螺提供了可能。 根據(jù)上述結(jié)果，兼顧到保護淡水魚類資源，茶皂素在水體中用于滅螺的濃度，一般以3.0-5.0mg/L為宜，在華南、中南二區(qū)域可采用浙江、湖南、江西等地所產(chǎn)茶籽餅粕提取的茶皂素；在西南如云、貴、川等地可采用云南所產(chǎn)茶籽餅粕提取的茶皂素，但其使用濃度宜控制在2-3mg/L 。至于使用方法，因各地條件不一，使用習慣不一樣，以本實驗而論，以采用浸殺滅螺效果較好。 |
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